纺织学报 ›› 2012, Vol. 33 ›› Issue (8): 82-86.

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一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达

 蒋海芹, 毕云枫, 华欣春, 陈丽丽, 徐雪霏, 沈明浩   

  1. 吉林农业大学食品科学与工程学院
  • 收稿日期:2011-09-14 修回日期:2012-01-04 出版日期:2012-08-15 发布日期:2012-08-08
  • 通讯作者: 沈明浩 E-mail:shenmh2003@yahoo.com.cn
  • 基金资助:

    吉林省科技厅课题

Cloning and expression of β-1,4-endoglucanas gene from Symbiobacterium thermophilum

 JIANG  Hai-Qin, BI  Yun-Feng, HUA  Xin-Chun, CHEN  Li-Li, XU  Xue-Fei, SHEN  Ming-Hao   

  1. College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University
  • Received:2011-09-14 Revised:2012-01-04 Online:2012-08-15 Published:2012-08-08
  • Contact: SHEN Ming-Hao E-mail:shenmh2003@yahoo.com.cn

摘要: 摘要:【目的】筛选耐热性好的葡聚糖内切酶基因,以构建耐热且酶活高的基因工程菌。【方法】以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。【结果】该基因大小为1101bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60kDa,纯化后重组酶活力为103U/mL;酶学性质实验表明该酶最适pH为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH稳定性。【结论】首次将S.thermophilum中的β-1,4-葡聚糖内切酶基因重组到表达载体pET32a(+)中,在大肠杆菌中得到高效表达,为该酶在食品、纺织、化工等领域的广泛应用奠定基础。

关键词: 纤维素 ,  , &beta, -1, 4-葡聚糖内切酶 , 嗜热梭菌 , 克隆 , 原核表达

Abstract: Abstract: [Objective]To screen endoglucanas gene with thermostability,and construct themostable engineering bacteria with high enzyme activity.[Methods]A gene encoding endoglucanase from S.thermophilum IAM 14863 was cloned and recombinanted into expression vector pET32a(+),then the recombinant vector pET32a-Glu was transformed and expressed in E.coli BL21(DE3)PLYS.[Results]The whole length of is 1101bp,which encodes 366 amino acids.The result of SDS-PAGE showed that the gene was effectively expressed in E.coli BL21(DE3)PLYS,and the enzyme showed that a molecular weight of 60kDa approximately.The enzyme activity was 103 U/mL after purification.Characterization of the expression product showed that the optimum pH value was about 5,and the optimum reaction temperature was at 55℃,and expression product displayed better thermal stability(about 75℃)and pH stability. [Conclusion]The research first recombinanted β-1,4-endoglucanas gene from S.thermophilum into expression vector pET32a(+) and expressed highly in E. coli. It will lay the foundation for food,textile,chemical and other fields by widely using the enzyme.

Key words: cellulase ,  , &beta, -1,4-endoglucanas ,  , Symbiobacterium thermophilum , cloning , prokaryotic expression

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