纺织学报 ›› 2012, Vol. 33 ›› Issue (8): 82-86.
蒋海芹, 毕云枫, 华欣春, 陈丽丽, 徐雪霏, 沈明浩
JIANG Hai-Qin, BI Yun-Feng, HUA Xin-Chun, CHEN Li-Li, XU Xue-Fei, SHEN Ming-Hao
摘要: 摘要:【目的】筛选耐热性好的葡聚糖内切酶基因,以构建耐热且酶活高的基因工程菌。【方法】以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。【结果】该基因大小为1101bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60kDa,纯化后重组酶活力为103U/mL;酶学性质实验表明该酶最适pH为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH稳定性。【结论】首次将S.thermophilum中的β-1,4-葡聚糖内切酶基因重组到表达载体pET32a(+)中,在大肠杆菌中得到高效表达,为该酶在食品、纺织、化工等领域的广泛应用奠定基础。
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